TDT的使用?
末端转移酶在分子生物学中的应用。它可以被用来在cDNA末端的快速扩增(RACE)中来添加核苷酸(nucleotide),然后可以用来作为在后续PCR的引物(primer)的模板。它也可以用于添加标记放射性同位素的核苷酸,例如在TUNEL检测(末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(dUTP Nick End Labeling)),用于细胞凋亡的示范(其中的标记,在某种程度上,通过片段化DNA来进行)。也可用于治疗急性淋巴性白血病诊断之免疫荧光测定(immuno-fluorescence)。
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在免疫组织化学中,抗体TdT酶可用于显示未成熟的T细胞和B细胞以及多能的造血(Haematopoiesis)干细胞的存在,其具有抗原,而成熟的淋巴样细胞总是呈TdT阴性。而末端转移酶阳性的细胞中发现少量的健康淋巴结和扁桃体,急性淋巴细胞白血病的恶性细胞也呈TdT阳性,而抗体,因此可以被用来作为面板诊断及区别这种疾病的一部分,比如,初发期的小细胞肿瘤(small cell tumours of childhood)。
cDNA的技术原理是什么?
cDNA-AFLP技术结合了RT-PCR和AFLP技术,其基本原理:以纯化的mRNA为模板,反转录合成cDNA。
用识别序列分别为6-bp和4-bp的两种限制性内切酶酶切双链cDNA,酶切片段与人工接头连接后,利用与接头序列互补的引物进行预扩增和选择性扩增,扩增产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳显示.
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